基因扩增实验又称PCR实验,其特点是能将微量的DNA大幅增加,PCR是分子生物学研究和实验的常规方法,广泛应用于生物学各个领域,例如:艾滋病检测、乙型肝炎、禽疫病、癌基因的检测和诊断,DNA指纹、个体识别、亲子鉴定及法医物证,动、植物检疫,动物及其衍生产品检测,动物饲料、化妆品、食品卫生检测,转基因作物与转基因微生物检测等。
PCR扩增检验实验室原则上分为四个单独的工作区域:试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区、扩增产物分析区。
为避免交叉污染,进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行,即只能从试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。 各实验区之间的试剂及样品传递应通过传递窗进行。
PCR扩增检验实验室原则上分为四个单独的工作区域:试剂贮存和准备区、标本制备区、扩增反应混合物配制和扩增区、扩增产物分析区。
为避免交叉污染,进入各个工作区域必须严格遵循单一方向进行,即只能从试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增反应混合物配制和扩增区→扩增产物分析区。 各实验区之间的试剂及样品传递应通过传递窗进行。
1.在物理空间上,必须是完全相互独立的,各区域无论是在空闲还是在使用中,应始终处于完全的分隔状态。
2.不能有空气的直接相通。
2.不能有空气的直接相通。
理想的PCR实验室设计A
理想的PCR实验室设计B
四个区域空调通风室内设计参数总结
一、使用实时荧光PCR仪依据
卫生部办公厅关于印发《医疗机构临床基因扩增管理办法》的通知;医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则;卫办医政发〔2010〕194号。
合并:扩增区、扩增产物分析区可合并。
二、PCR实验室需要的仪器设备
试剂准备区:冰箱、超净台、加样器、混匀器、天平和离心机等。
标本制备区:生物安全柜、加样器、离心机、温育仪、混匀器等。
扩增区:核酸扩增仪、超净台、微量加样器、离心机、可移动紫外灯、配备UPS电源。
分析区:酶标仪、洗板机、加样器和水浴箱等。
三、PCR污染的预防与控制
PCR实验室设计的核心问题是如何避免污染。常见的有以下几种污染类型:扩增产物的污染;天然基因组DNA的污染;试剂的污染以及标本间的污染。要避免污染,首先应是预防,而不是排除。
四、PCR实验室装修
1.实验室墙壁、顶板和地板应当光滑、易清洁、防渗漏并耐化学品和消毒剂的腐蚀。地面应防滑,不得在实验室内铺设地毯和悬挂窗帘。实验室的墙体,包括顶棚,应结构牢固、气密性好、所有阴角采用圆弧形线条过渡;墙体内壁光洁、不吸附、耐腐蚀、易清洗消毒;墙体和吊顶建议使用彩钢板。
2.地面材料应满足无缝隙、无渗漏、光洁、耐腐蚀的要求。
3.灯具要选用净化灯具,能达到便于清洗、不积尘的特点。实验室应设应急照明装置,同时考虑合适的安装位置,以保证人员安全离开实验室。
4.有可靠的电力供应和应急照明。每个房间必须装有紫外线杀菌灯,杀菌灯的安装高度在1.8~2.1m之间。
5.传递窗内部安装有紫外灯,供消毒用。
6.应配备足够的固定电源插座,避免多台设备使用共同的电源插座。应有可靠的接地系统,应在关键节点安装漏电保护装置或监测报警装置。
7.实验室台(桌)柜和座椅等应稳固和坚固,边角应圆滑。实验台面应防水,并能耐受热、有机溶剂、酸碱、消毒剂及其他化学剂,一般采用环氧树脂台面。
8.实验台中的橱柜和实验台应牢固,实验台、柜和其他设备之间应保持一定距离,以便清洁。
9.实验室门为净化门,应有可视窗并带自动闭门器,实验室的门与门不能相对开启,必须错位开启。并达到适当的防火等级,门锁及门的开启方向应不妨碍室内人员逃生。
10.实验室应设洗手池,水龙头开关宜为非手动式,宜设置在靠近出口处。
11.给水管道应设置倒流防止器或其他有效的防止回流的装置;给排水系统应不渗漏,下水应有防回流设计。
12.应配备适用的应急器材,如消防器材、意外事故处理器材、急救器材等。
13.应配备适用的通讯设备。
五、PCR实验室建设相关文件
1.《医疗机构管理条例》。
2.《医疗机构临床实验室管理办法》。
3.《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》。
4.《医疗机构临床基因扩增实验室管理办法》。
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卫生部办公厅关于印发《医疗机构临床基因扩增管理办法》的通知;医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则;卫办医政发〔2010〕194号。
合并:扩增区、扩增产物分析区可合并。
二、PCR实验室需要的仪器设备
试剂准备区:冰箱、超净台、加样器、混匀器、天平和离心机等。
标本制备区:生物安全柜、加样器、离心机、温育仪、混匀器等。
扩增区:核酸扩增仪、超净台、微量加样器、离心机、可移动紫外灯、配备UPS电源。
分析区:酶标仪、洗板机、加样器和水浴箱等。
三、PCR污染的预防与控制
PCR实验室设计的核心问题是如何避免污染。常见的有以下几种污染类型:扩增产物的污染;天然基因组DNA的污染;试剂的污染以及标本间的污染。要避免污染,首先应是预防,而不是排除。
四、PCR实验室装修
1.实验室墙壁、顶板和地板应当光滑、易清洁、防渗漏并耐化学品和消毒剂的腐蚀。地面应防滑,不得在实验室内铺设地毯和悬挂窗帘。实验室的墙体,包括顶棚,应结构牢固、气密性好、所有阴角采用圆弧形线条过渡;墙体内壁光洁、不吸附、耐腐蚀、易清洗消毒;墙体和吊顶建议使用彩钢板。
2.地面材料应满足无缝隙、无渗漏、光洁、耐腐蚀的要求。
3.灯具要选用净化灯具,能达到便于清洗、不积尘的特点。实验室应设应急照明装置,同时考虑合适的安装位置,以保证人员安全离开实验室。
4.有可靠的电力供应和应急照明。每个房间必须装有紫外线杀菌灯,杀菌灯的安装高度在1.8~2.1m之间。
5.传递窗内部安装有紫外灯,供消毒用。
6.应配备足够的固定电源插座,避免多台设备使用共同的电源插座。应有可靠的接地系统,应在关键节点安装漏电保护装置或监测报警装置。
7.实验室台(桌)柜和座椅等应稳固和坚固,边角应圆滑。实验台面应防水,并能耐受热、有机溶剂、酸碱、消毒剂及其他化学剂,一般采用环氧树脂台面。
8.实验台中的橱柜和实验台应牢固,实验台、柜和其他设备之间应保持一定距离,以便清洁。
9.实验室门为净化门,应有可视窗并带自动闭门器,实验室的门与门不能相对开启,必须错位开启。并达到适当的防火等级,门锁及门的开启方向应不妨碍室内人员逃生。
10.实验室应设洗手池,水龙头开关宜为非手动式,宜设置在靠近出口处。
11.给水管道应设置倒流防止器或其他有效的防止回流的装置;给排水系统应不渗漏,下水应有防回流设计。
12.应配备适用的应急器材,如消防器材、意外事故处理器材、急救器材等。
13.应配备适用的通讯设备。
五、PCR实验室建设相关文件
1.《医疗机构管理条例》。
2.《医疗机构临床实验室管理办法》。
3.《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》。
4.《医疗机构临床基因扩增实验室管理办法》。
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